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都在談Covid-19檢測夠不夠,難不難,那到底是檢測什麽?有哪些檢測?

(2020-05-11 07:02:01) 下一個

冠狀病毒病-19(COVID-19)大流行繼續影響世界各地,然而醫學科學因此也在不斷提高,對SARS-CoV-2(引起COVID-19的冠狀病毒)的診斷檢測也是不斷更新,所謂時勢造英雄,就在昨天FDA又批準了一項新的測試,是聖地亞哥Quidel公司的基於病毒抗原檢測。所以,目前對SARS-CoV-2的檢測大概分為三大種:

 

一)抗原檢測

 

五月八號,美國FDA批準緊急授權(EUA)給南加州聖地亞哥公司(Quidel)的Covid-19快速抗原診斷檢測, 這是全球首個Covid-19病毒抗原檢測方法。商品名稱是Sofia 2 SARS 抗原熒光免疫檢測分析儀( Sofia® 2 SARS Antigen FIA, a rapid point-of-care test to be used with the Sofia 2 Fluorescent Immunoassay Analyzer)。

 

以前一般(下麵介紹)用PCR方法檢測病毒核酸(RNA)。這個新方法測病毒表麵的蛋白抗原。所以比核酸檢測快且便宜。公司準備每周生產可測幾百萬例的試劑規模。

 

同樣需釆集鼻腔,或鼻咽拭子樣本來測抗原。幾分鍾內出結果。敏感度約85%,所以假陰性可以達15%,但特異性高,快速,便宜,方便,可用於醫院,診所,甚至工作單位或學校。

 

二)核酸檢測(通過RT-PCR檢測病毒RNA)

 

迄今為止,診斷COVID-19的最常用,最可靠的測試是使用鼻咽拭子或其他上呼吸道標本(包括咽喉拭子或唾液)進行的RT-PCR測試。不同的製造商使用的是各種各樣的RNA基因靶標,大多數測試針對的是1個或多個包膜(env),核衣殼(N),刺突(S),RNA依賴性RNA聚合酶(RdRp)和ORF1基因。根據比較研究,這幾種測試對單個基因的敏感性是差不多,隻是RdRp-SARSr(Charité)引物探針的靈敏度稍低,這可能是由於反向引物不匹配所致。

 

在大多數有症狀COVID-19感染的個體中,通過周期閾值(cycle threshold ,Ct)測量的鼻咽拭子中的病毒RNA最早在症狀的第1天就可以檢測到,並且在症狀發作的第一周達到高峰。Ct是產生熒光信號所需的複製周期數,較低的Ct值代表較高的病毒RNA載量。臨床報道Ct值小於40為PCR陽性。這種陽性在第3周開始下降,隨後變得檢測不到。但是,重症住院患者的Ct值低於輕度患者的Ct值,PCR陽性可能會在發病後持續3周,而大多數輕度病例會3周內變為陰性。但是,“陽性” PCR結果僅反映病毒RNA的檢測陽性,並不一定表示存在活病毒。

 

在某些情況下,即使在首次陽性測試第6周之後,還可以用RT-PCR檢測到病毒RNA。間隔24小時連續進行2次陰性PCR試驗後,也有幾例報告為陽性。目前尚不清楚這是測試錯誤,重新感染還是病毒重新激活。

 

在一項針對9名患者的研究中,從疾病發作的第8天開始就無法再成功分離培養物中的病毒,這與第一周之後的感染力下降相關。

 

這是為什麽CDC“以症狀為基礎“的策略的部分原因。美國疾病控製與預防中心(CDC)指出,醫護人員可以重返工作康複定義為:

 

1)退燒後至少三天(72小時)在沒有使用退燒藥情況下仍無發燒,

2)呼吸道症狀(例如咳嗽,呼吸急促)改善至少三天;

3)自症狀首次出現以來至少已經超過了10天。滿足後則醫護人員可以重返工作崗位。 

 

除鼻咽拭子外,其他不同的樣本的PCR陽性時間線也不同。鼻咽拭子陰性後,痰液中PCR陽性率下降較慢,可能仍為陽性。在一項研究中,在96名受感染患者中,有55名(57%)觀察到糞便中PCR陽性,並且在鼻咽拭子以外的糞便中保持陽性4至11天,但與臨床嚴重程度無關。Wölfel等認為痰和糞便中PCR的持續時間相似。

 

在205例確診COVID-19感染的患者中,支氣管肺泡灌洗標本中RT-PCR陽性率最高(93%),其次是痰液(72%),鼻拭子(63%)和咽拭子(32%)最低 。假陰性結果主要是由於與疾病發作有關的采樣時間不適當和采樣技術的不足,尤其是鼻咽拭子。大多數RT-PCR測試的特異性為100%,因為引物設計對SARS-CoV-2的基因組序列具有特異性。由於技術錯誤和試劑汙染,有時也可能會出現假陽性結果。

 

三)抗體檢測(SARS-CoV-2抗體的檢測)

 

這是通過測量宿主對SARS-CoV-2感染的免疫反應(產生抗體)間接檢測COVID-19感染。血清學診斷對於輕度至中度疾病的患者尤其重要,抗體可能會在發病後兩周後可測出。血清學診斷也正在成為了解社區中COVID-19感染的程度, 並能那些人是具有免疫力的個體(可能“受到保護”免於感染的個體)。

 

最敏感,最早的血清學標記物是總抗體,其水平從症狀發作的第二周開始增加。盡管IgM和IgG ELISA甚至在症狀發作後的第四天就可能是陽性的,但更高的水平發生在疾病的第二和第三周。

 

根據對23例患者的檢測,在臨床疾病發作的第三周和第四周之間,所有患者均發生IgM和IgG血清轉化,此後IgM開始下降並每周降低至更低水平,在第5周時幾乎消失,而在第7周時IgM就完全消失了, 但IgG第7周後能能測出。在對140位患者的研究中,針對核衣殼(NC)抗原的PCR和IgM ELISA組合敏感性為98.6%,而單次PCR測試為51.9%。在發病的第5.5天後,定量PCR的陽性率比IgM高,而IgM ELISA的陽性率更高。

 

基於ELISA的IgM和IgG抗體測試對COVID-19的診斷具有95%以上的特異性。使用初始PCR和第二個2周後測試配對的血清樣品可以進一步提高診斷準確性。通常,大多數抗體是針對病毒最豐富的蛋白質(即nucleocapsid ,NC)產生的。因此,檢測NC抗體的測試將是最敏感的。

 

但是,S(RBD-S)蛋白的受體結合結構域是宿主附著蛋白,並且針對RBD-S的抗體將更具特異性,並且有望被成為中和抗體。因此,使用一種或兩種抗原檢測IgG和IgM會導致高靈敏度。然而,抗體可能與SARS-CoV以及其他冠狀病毒具有交叉反應性。

 

用於檢測抗體的快速即時檢測已被廣泛的開發和銷售,並且質量變異很大。許多製造商沒有告訴所用抗原的性質。這些測試本質上是純定性的,隻能表明是否存在SARS-CoV-2抗體。中和抗體的存在隻能通過噬斑減少中和測試(plaque reduction neutralization test.)來確認。但是,已有證據顯示通過ELISA檢測到的高滴度的IgG抗體與中和抗體呈正相關。由中和抗體賦予的長期持久性和保護期限仍然未知。

 

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夢筆生花-96 回複 悄悄話 雖然專業性太強,不太理解,但有一點是肯定的,這次必定會是一場艱苦卓絕的攻堅戰。看了英國女王連續發表演講,更堅定了我們的信念,光明一定會戰勝黑暗。向戰鬥在開發快速準確測試,特效藥和疫苗的科學工作者們致敬!
風城黑鷹 回複 悄悄話 回複 '紅米2019' 的評論 : May see this article:


W?lfel R? , Corman VM? , Guggemos W? , et al. Virological assessment of hospitalized patients with COVID-2019. ? Nature. 2020. Published online April 1, 2020. doi:10.1038/s41586-020-2196-xPubMedGoogle Scholar
紅米2019 回複 悄悄話 在一項針對9名患者的研究中,從疾病發作的第8天開始就無法再成功分離培養物中的病毒,這與第一周之後的感染力下降相關。

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