內源性合成。正常情況下，人體所需的膽固醇有一半以上是由機體自身合成的。內源性膽固醇在肝髒和小腸黏膜由乙酸合成而來，從糖類、蛋白質、脂肪代謝產生的乙酰輔酶A是合成膽固醇的基質，合成過程受B一羥基一p一甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶催化，生成的膽固醇亦以脂蛋白形式進入血循環。正常成年人每天約可合成19左右的膽固醇，幾乎機體所有的細胞都能合成膽固醇，肝髒是機體合成膽固醇最旺盛的器官，占合成重量的一半以上，其次為小腸和皮膚。
膽固醇主要來自人體自身的合成，食物中的膽固醇是次要補充。如一個70kg體重的成年人，體內大約有膽固醇140g，每日大約更新1g，其中4/5在體內代謝產生，隻有1/5需從食物補充，每人每日從食物中攝取膽固醇200mg，即可滿足身體需要。膽固醇的吸收率隻有30%，隨著食物膽固醇含量的增加，吸收率還要下降，200mg大約相當於1個雞蛋中的膽固醇含量或3-4個雞蛋的膽固醇吸收量。專家建議每天攝入50mg~300mg膽固醇為佳。
外源性攝入。飲食中的膽固醇幾乎全部來自動物性食物，其中以禽卵和動物的髒器及腦髓中含量最為豐富。食物中的膽固醇多為遊離(自由)膽固醇，少量為膽固醇酯。進食後，食物中的遊離膽固醇在小腸腔內與磷脂、膽酸鹽結合形成微粒，被腸黏膜細胞吸收後與長鏈脂肪酸結合形成膽固醇酯。大部分的膽固醇酯形成乳糜微粒，少量組成極低密度脂蛋白，經淋巴係統進入血循環。膽固醇酯需在胰膽固醇酯酶的作用下，水解為遊離膽固醇才能被機體吸收。食物中的膽固醇大約有40%能夠被小腸吸收。
