最好的中秋節禮物

嗬嗬，今天一大早收到通知，送Nature子刊的文章終於接受了。

這個project很不順。從試驗設計開始老板就認為CRISPR/HDR成功率太低，不讓作。等到我說服他，好
幾個月都過去了。設計時把我幾十年的分子生物學和tissue culture經驗，能想到的可能
改進成功率的方式都加進去了，才讓老板同意我放手一搏。幾個月後，終於作完了第一輪，還差點就沒拿到我要的
東西：那天在顯微鏡下找得頭昏眼花，沒有任何克隆，就垂頭喪氣地給老板打個招呼，準備放棄了。回到實驗室正想扔細胞培養皿的那一瞬間，突然想到舉起來對著日光燈肉眼看了一下，一個白色的克隆就在培養皿的最邊沿--最後證明這個克隆是一個基因的兩個copy都按我設計的突變了。。。。

這一年來，又是mycoplasma汙染（實驗室的host cell line本身就汙染了！），又是克隆不純，搞得很頭疼。最後稿子送出去了，作science這邊的reviewer對突變子有興趣，對方法沒興趣，意見一堆，要把method這一節砍掉；作方法的reviewer對突變子本身沒興趣，對方法上所有改進作用的思路都感興趣，也認為有道理。但對我們沒有和其它方法進行試驗對比很遺憾，覺得作為方法的文章發表有欠缺。。。

老板說：你也好多年沒發第一作者的文章了（上次發是2008年，JBC,還好被Faculty 1000選中了），今天回家開瓶酒喝吧。

不錯不錯，了結了這個，就可以全心全意接一個馬上要畢業學生的project了。學生這個project剛發了Nature子刊，看能不能搞個grant。近十年實驗室的所有grant都有我的影子。一個RO1的renewal全靠我篩出來的compound;一個R21在第一次申請失敗後我插進去補數據，第二輪成功；一個DOD的grant雖然是學生為主，但篩選的第二輪的方法就是
我花了幾個月來專為他develop的；最新的RO1 renewal也是把我上麵的mutant cell lines的數據加進去，並且根據我的方法再提出新的idea後，第三輪才拿下來的。學生的這個project去年寫了一個proposal,可惜沒拿到錢。希望我接手後，現在文章也發表了，能和過去十年一樣，有奇跡發生。我還需要5-6年的飯碗，把兒子的大學學費解決呢。

我的CRISPR/HDR方法可能對大多數人沒有幫助。我是利用mutant的一個特點來篩選的。我用兩個guide sequences把我的基因功能搞掉（我的細胞靠這個基因才能生長）, 先篩transfected細胞，再用mutant的特性來篩選我要的克隆，成功率很高。挑選出來的克隆，70%是帶mutation的。大約1/4是兩個copy都按我設計的突變，1/2是有一個copy按我設計的突變，另外1/4原因不明。因NPG問我們有沒有興趣把方法發表在Scientific Data上，細節暫時不能說。

祝各位網友中秋快樂！

（二0一六年九月十五日）

[A-mao]

回複 'Coke5379' 的評論 :
一樣不容易呢。我五六年才發一篇地一作者的文章。當然大老板手下容易得多。

[A-mao]

回複 '亮亮媽媽' 的評論 :

亮媽，現在周末都在釣魚。菜種完了，就開始秋釣了。crappie不錯，數量和大小敢不上春天的，但每次都有20-30條，五到十斤的收獲。線輕鬆幾天，等下一個project開始，估計是冬天了，就天天在實驗室幹活。：）。

[Coke5379]

搞生物的就是容易發文章。

[亮亮媽媽]

祝賀阿貓。不容易，應該大大地慶祝一下。周末快樂。