現在越來越多的實驗室都擁有了自動化程度比較高的分離純化工具---快速製備色譜儀(中低壓製備色譜)，常稱之為過柱機或者Flash。由名字可知，這就是個替代手工過矽膠柱的工具，他所用到的柱子我們常叫它Flash柱。今天化學科訊就分享一下Flash柱分離的方法摸索的一些建議。
這裏有一個進樣公式，即：J =Z×0.208%×N
1）進樣量用漢語拚音的J來表示；Z為矽膠裝填量
2）擬將ΔRf的差值精確到0.01，那麽0.01的差值設置為1個單位，用N來表示；
3）進樣係數：0.208%，是基於40-60um粒徑（300-400目），60A孔徑的矽膠，在特定的壓力條件、理想流速下，計算出的理想進樣係數。考慮到實際使用過程中樣品裝樣不平、操作誤差大等因素，以0.2%代替，更接近於實際；
舉個例子：80g的柱子在如下條件中可分離多少樣品？
薄層數據：Rf1=0.19，Rf2=0.33
則N=（0.33-0.19）÷0.01=14
按公式計算，J=80×0.2%×14=2.24g，則，該樣品依照此薄層數據，80g柱子最大進樣量為2.24g。
再來一個例子算算看。
薄層數據：Rf1=0.25，Rf2=0.21，120g的柱子能分多少樣品？
N=（0.25-0.21）÷0.01=4
進樣量J=120×0.2%×4=0.96g
不難看出，ΔRf差值越小，進樣量就越少。我們應根據目標物與雜質的分離度（ΔRf的差值）來選擇使用何種規格的柱子。
該進樣公式可優化為：J=Z×0.2×ΔRf，
即：進樣量=矽膠量（實際克數）×0.2×Rf的差值
選好了合適的柱子，那麽，該怎麽設定分離方法呢？這裏有一個非常經典的方法。
線性梯度法：
-
初始溶劑比例=（薄層跑板的比例÷4）
-
最終溶劑比例=（薄層跑板的比例×2）
-
第一部分：初始比例，走1柱體積
-
第二部分：從初始比例線性漸增至最終比例，走11個柱體積
-
第三部分：最終比例，走2個柱體積。
如圖所示
例如：跑板的溶劑係統是石油醚：乙酸乙酯=4：1，即乙酸乙酯的含量是20%，那麽走線性梯度的初始溶劑比例為20%÷4=5%乙酸乙酯，走1個柱體積；然後從5%逐漸遞增到20%×2，即40%，這個漸增的過程共計11個柱體積；最後以40%的比例走兩個柱體積，結束，共計14個柱體積！
注意：這個方法對泵的精度要求很高，溶劑調節比例的準確度在1%以內。如biotage公司的isolera one；isco公司的RF200均可達到要求。如果您用的是國產的設備，或者精度比較差的設備（如isolera prime、RF75等），請將此方法的最終溶劑比例調節為：薄層跑板的比例×1.5，其他條件不變。
實驗人員可以根據自己樣品及過柱情況來增加或減少實際過柱柱體積數。
特別需要說明的是：根據薄層板數據建立的這個方法的前提條件是：爬板溶劑比例應能將目標物的Rf值落在0.1-0.4之間！！
進樣量的單位是g
