在有機化合物的分離中, 異構體的分離是最讓人頭疼的一件事！拋開對映異構體的分離（拆分）不說，一些非對映體、順反異構體的混合物雖然理論上可以在非手性環境中分離，可實際情況中卻往往讓人傷透了心（不是一個CAS的點，都是裝純）。如果要想拿到純的核磁譜，怎麽辦？把極性往小了調？把柱子往高了裝（慌的一匹）？
君莫慌！今天，小編就給大家分享一個多數人不知道的分離技術，可以專門對付極性相似的不飽和化合物：硝酸銀絡合法（柱色譜或萃取）。
硝酸銀-柱色譜分離法
含有雙鍵異構體的揮發油、萜類等天然產物或小分子化合物用一般色譜法難以分離，但用這種硝酸銀柱色譜法可就神奇多了。 在談原理和應用之前，讓我們先看看這種分類方法的效果，以下麵兩個板子為例：
圖1. 從右到左，AgNO3的量逐漸增多，分離越來越清晰
圖2 添加AgNO3和未添加AgNO3的板子對比
怎麽樣？是不是很開
，知道其中的原理，你定會用的遊刃有餘：
AgNO3中的銀離子為d10型離子, 具有空的S和P軌道。SP 雜化後, 能和含有成鍵電子的鍵, 形成二配位的穩定性不同的配合物。① 當雙鍵π電子作為供電子配體時, 與Ag 的空SP 雜化軌道重疊, 形成三中心配鍵; ② 當Ag作為供電子者時, 其d 軌道是全充滿, 可以供電子與π反鍵軌道重疊, 形成三中心配鍵。Ag 與雙鍵形成配合物時, 這兩種鍵可同時形成。這種配合物的穩定性, 既受電子效應的影響, 又受空間效應的影響。
圖3. I：SP 雜化與π 電子重疊；II：SP 雜化與π反鍵軌道重疊
太複雜，有沒有什麽一般規律，就知道你會這麽問，小編已經幫你找到啦，一共5點：
在相同情況下雙鍵數越多, 形成的配合物越牢固，難洗脫；
當有環狀時，環外比環內雙鍵者與AgNO3配合牢固；
雙鍵位置不同時，末端最牢，順式次之，反式最不牢；
銀離子與多重苯環芳烴的配合物比單環的芳烴易形成；
碳原子數與含雙鍵數( 或大π鍵數) 之比小於或等於6 時, 則可能與Ag離子配合, 比值越小配合反應越易進行。
硝酸銀矽膠的使用與正相矽膠基本相同，但需要特別注意的是要在完全避光！完全避光！完全避光！的情況下使用。
天然產物分離案例
硝酸銀矽膠色譜法在許多天然產物的分離中都有成功的案例，包括萜類、揮發油等許多抗癌有效成分的分離，下麵介紹幾例，大家可對照上述規律嚐試判斷洗脫順序。
1. 半邊旗中抗癌有效成分5F的分離（與4F混合），洗脫順序5F > 4F。
圖4. 半邊旗中抗癌有效成分5F的分離
解析：兩者母核相同，4F 無雙鍵；5F 有一環外雙鍵, 易與Ag形成配合物而洗脫分離。
2. 月桂油中3種不飽和化合物的分離，洗脫順序為 III > II > I。
解析：I 為兩個末端雙鍵，吸附最牢；II為一個末端雙鍵，吸附次之；
III無末端雙鍵，僅環內雙鍵，吸附最弱。
3. 植物細辛中的3種天然產物成分：α-細辛醚、β-細辛醚、歐細辛醚，用2.0%AgNO3-矽膠柱分離，苯-乙醚（5∶1）洗脫，流出先後順序為：α-細辛醚＞β-細辛醚＞歐細辛醚。
圖5. 細辛中有效成分的分離
解析：因為α-細辛醚環外雙鍵為反式，與 AgNO3絡合不牢固；β-細辛醚為順式，與AgNO3絡合能力大於α-細辛醚，而歐細辛醚為末端雙鍵，與AgNO3絡合能力最強。
硝酸銀絡合萃取法
除了硝酸銀-柱色譜外，硝酸銀絡合萃取法也可以用於許多不飽和化合物的分離。
1. 魚油中EPA ( 五個雙鍵) 和DHA( 6 個雙鍵) 都對人體有重要的生理活性作用，都能與Ag離子形成很穩定的親水性配合物, 而從魚油相中分離出來。
2. DHA 乙酯、烯丙醚、苯、油酸乙酯4 個有機物。除油酸乙酯外, 其他3 種都成功地形成配合物而轉人水相中。3 種配合物穩定性為: 烯丙醚> DHA 乙酯> 苯。
解析：在沒有空間位阻時, 碳原子數與含雙鍵數( 或大二鍵數) 之比小於或等於6時, 則可能與Ag+ 配合, 比值越小配合反應越易進行。
總結：硝酸銀絡合法( 萃取或色譜法) 可以幫助結構和物理化學性質相近、用普通色譜法或萃取法難以奏效的雙鍵化合物的分離，在醫藥界已經被成功運用。但也存在一些弊病：比如易混入硝酸銀這一雜質, 除去略繁瑣；多雙鍵有機物具一定的還原性易將Ag+還原成Ag ;Ag+本身也不穩定, 易還原為Ag；AgNO3具腐蝕性; Ag的回收與再生問題, 因為銀還是較昂貴的金屬等。可否用別的金屬元素代替銀離子，擴大絡離子的應用範圍? 例如二價銅、鋅等元素, 有待進一步探討。
參考資料：
廣州中醫藥大學學報，DOI：10.3969/j.issn.1007-3213.2004.04.023
Separations of lipids by silver ion chromatography，JOURNALO F LIPIDR ESEARCHV
