薄層層析（TLC）是常用的一種分離和分析方法。
原理：利用吸附劑對樣品中各組分吸附能力不同，及展開劑對它們的解吸附能力的不同，使各組分達到分離的目的。
特點：微量、快速、簡單、節省。
分類：
吸附薄層層析（矽膠）
分配薄層層析（纖維素）
薄層離子交換層析（離子交換劑）
薄層凝膠層析（分子篩凝膠）
矽膠：表麵帶有矽醇基（-Si-OH），呈弱酸性（pH=4.5），活性矽膠適合分離酸性或者中性化合物，如酚類、有機酸、甾體化合物以及氨基酸類，是基於吸附作用。非活性矽膠含有一定的水，在分離色素時是基於分配作用。
氧化鋁：弱堿性（pH=9）、酸性（pH=4）及中性（pH=7.5）三種氧化鋁。弱堿性氧化鋁用來分離中性或堿性化合物；中性氧化鋁適用於酸性及對堿不穩定的化合物的分離；酸性化合物可用酸性氧化鋁分離。
化學鍵合相（C18、C8等）
各種矽膠板的區別：
矽膠G：含有13%煆石膏（GYPSUM）粘合劑的矽膠。
矽膠H：不含粘合劑的矽膠。
矽膠HF254：不含粘合劑，含有一種無機熒光劑（如錳激活的矽酸鋅），在254nm波長紫外光下，呈強烈黃綠色熒光。
矽膠GF254：含有煆石膏粘合劑，含熒光劑，在254nm波長紫外光下，呈強烈黃綠色熒光。
矽膠HF254+366：不含粘合劑，在254nm與366nm波長有熒光。
矽膠PF254：製備型，在254nm有熒光（有熒光劑，適用於不發光不易顯色物質的製備與分離）。
幾種矽膠板標注方法：
原點間距0.8~1mm，底邊距離0.5~0.8cm即可。
反應液的取樣：
|
一般極性溶劑體係 |
強極性溶劑體係 |
需要淬滅的體係 |
強堿、酸性物質 |
|
可以直接取樣，也可以稀釋後取樣。 |
最好簡單後處理（加水和有機溶劑萃取）以後取樣。 |
處理（如加水或酸和有機溶劑）後取樣 |
最好中和後取樣 |
Note：1. 產品在水相或有機相
2. 有無沒有溶解的固體
點樣：
手動點樣：靈活方便，常用於各種TLC鑒別中。
自動點樣：重現性和準確性好，常用於薄層掃描法的含量測定。
點樣量：原點位置的負荷有限，體積0.5~10ul，濃度通常為0.5~2mg。直徑3mm以內。
樣品溶劑：原則上應選擇對樣品可以溶解，但溶解度不是很大的溶劑。
Note：1. 點樣的濃度要控製適當。
2. 點的斑點較小，展開的TLC分離度好。
3. 0.3mm毛細點有機相，0.5mm點水較方便。
點樣常見問題：
1. 點樣量太大。展開劑不能全部負載。
2. 太濃了。展開劑從原點外圍繞行。
3. 濃。未分開。
4. 樣品溶劑殘留。吹幹時應注意高溫破壞樣品。
5. 點樣量太少。看不清楚。
6. 樣品溶劑中溶解度很大。原點將變成空心圓。
展開劑的選擇原則：
1. 對所需成分有良好的溶解性。
2. 可使各成分間有較好的分離。
3. 待測組分的Rf在0.2~0.8之間。
4. 不與待測組分發生化學反應。
5. 沸點適中，粘度較小。
6. 展開後組分斑點圓且集中。
7. 混合溶劑最好新鮮配置。
常用展開劑極性大小順序：
石油醚＜二氯甲烷＜乙醚＜四氫呋喃＜乙酸乙酯＜丙酮＜正丙醇＜甲醇＜水
展開劑體係的選擇原則：
※ 一般極性的化合物：PE/EA體係
※ 極性較大的化合物：DCM/CH3OH體係
※ 脂肪類胺化合物：在展開劑中加入0.1%（約為1滴）的氨水或三乙胺
※ 有羧基官能團存在的化合物：在展開劑中加入微量的醋酸（乙酸或甲酸的使用，一方麵增大展開劑極性，另外也可以抑製矽膠上羥基的作用，減少拖尾）
另外常用的混合體係：
PE/DCM，PE/Acetone，Ether/DCM，EA/DCM，EA/CH3OH
展開方法：
展開方法有單向、單向長板、多次多種極性展開、雙向展開等。
顯色：
一看：首先在日光下觀察，劃出有色物質的斑點位置
二照：在紫外燈下觀察有無暗斑或熒光斑點
三碘：大部分有機物會吸附碘可逆的產生棕色或黃色斑點
四顯：既無色又無紫外吸收得物質，可以用顯色劑顯色
製備TLC
洗脫劑應避免加入過多的甲醇，以免產物中混有大量的矽膠。
來自網絡
