手動過反相柱

在進行反相柱層析時，梯度洗脫開始以大比例極性水溶液開始，由於C18反相矽膠填料表麵疏水性，疏水官能團就會發生蜷縮，因此使用前需要用極性有機溶劑活化（疏水官能團得以舒展），再過渡到水溶劑（保持其吸附活性）。活化平衡的步驟必不可少，否則會明顯影響分離效率。

一、首先在柱子地下鋪一層1cm厚的石英砂。

二、裝入C18反相矽膠，甲醇潤柱，活化矽膠，此步驟必不可少。

三、完全潤濕矽膠後，上層留少量甲醇，輕輕敲擊，使填料上層更加平整。

四、平整後，將甲醇液麵壓到矽膠上沿，上層加入2cm厚的沙子。

五、用過柱體係的水相置換柱子裏的溶劑，準備上樣。

一般情況下，濕法上樣就可以了，最好用水相體係溶解樣品進行上樣，如果溶解度不好，可以加入少量的有機相促溶。上樣後，加入展開劑梯度洗脫，加入溶劑時不要將上層的沙子衝散。注意事項：由於反相柱的壓力比普通的正相柱大很多，整個操作過程要在通風櫥中進行，並且加壓時將通風櫥拉低，安全第一。梯度洗脫過程中，可以利用正相TLC監測反應，如果爬不起來可以嚐試一下EA:AcOH=200:1體係。

六、柱層析結束後，利用甲醇衝洗柱子，下次備用。

 

常用的水相體係：0.1%TFA水溶液，0.1%碳酸氫銨水溶液。

有機相體係：乙腈，甲醇。