公元前336年,馬其頓國王腓力二世被刺身亡,其子亞曆山大繼位(公元前336-前323)。他出兵鎮壓了希臘各邦的反抗,接著趁波斯帝國瀕臨崩潰之機,便以發動對波斯的戰爭來轉移希臘各邦反馬其頓的視線,並適應希臘工商業奴隸主擴大對東方的貿易的要求,大舉入侵東方。公元前334年,他率步兵3萬、騎兵5000、戰艦160艘,越赫勒斯滂海峽人小亞細亞,在格拉尼庫河附近打敗波斯軍。並用外交手段使小亞諸城不戰而降,占領了小亞。公元前333年,亞曆山大在伊索斯城附近大敗波斯王大流士二世,並俘虜其家眷。此後他揮軍南下,攻取腓尼基之後,於公元前332年進入埃及。他自稱太陽神“阿蒙之子”,得到埃及祭司的擁護,並在尼羅河三角洲西部建亞曆山大裏亞城。公元前331年,亞曆山大率軍經巴勒斯坦、敘利亞入兩河流域。同年9月在高加米拉與波斯軍決戰。波斯軍雖號稱百萬,但終因缺乏戰鬥力和指揮不當而徹底失敗,大流士三世逃至巴克特裏亞(大廈)被殺。戰後亞曆山大東進,先後攻占波斯首都巴比倫、蘇撤和舊都帕賽波裏斯。公元前329年,亞曆山大進兵中亞,入帕提亞、巴克特利亞、索格第安那(粟特)等地,遭到當地人民的激烈反抗,北上受挫,繼而轉向南方。公元前327年,從中亞攻入印度,占領印度河上遊地區。時值氣候不適,士兵厭戰思歸,加上土著居民的抵抗,亞曆山大被迫撤軍。公元前326年冬,亞曆山大率軍沿印度河南下,直達印度河三角洲。然後自率軍隊取陸路,命海軍將領涅阿爾庫斯率軍取海路並行西行,於公元前325年返抵巴比倫。至此,亞曆山大東侵結束。亞曆山大經過10年的東征,建立了西起希臘,東至印度河流域,南括埃及,北抵中亞的幅員遼闊的大帝國。亞曆山大東侵給被征服地區帶來深重的災難,但客觀上促進了東西方經濟、文化的交流。