調查研究小組“美國知情權 （USRTK） 已公開其獲得的有關 EHA 於 2018 年 3 月提交給美國國防高級研究計劃局 （DARPA） 的生態健康聯盟“化解蝙蝠傳播冠狀病毒的威脅”（DEFUSE） 撥款提案的整批文件。
通過信息自由請求獲得的 1,417 頁文件文件的發布是在 USRTK 去年 12 月 18 日早些時候發布的 235 頁文件之後發布的。
該文件包含 DEFUSE 提案的早期草案，該提案是在 PREventing EMerging Pathogenic Threats （PREEMPT） 計劃的保護傘下提交給 DARPA 的。這些文件還包括有關該提案的電子郵件。
USRTK 昨天（1 月 18 日）發布了整批文件，此前當天早些時候，一位名叫“Gumby”的人在 X（推特）上分享了同一批文件，“Gumby”通過單獨的信息自由 （FOI） 請求獲得這些文件。
這兩項 FOI 請求都是向美國地質調查局 （USGS） 提出的，該局是參與提交 DEFUSE 提案的組織之一。
“Gumby”說，他提出 FOI 請求是因為 USRTK 隻公布了它獲得的部分文件。
在“Gumby”收購了 USRTK 後，它急於發布其整批文件以及其記者 Emily Kopp 關於這些文件的文章。
根據調查組織 DRASTIC 於 2021 年 9 月公開的泄露文件，EHA 在其提案中要求在 3.5 年內總計 14,209,245 美元（第一階段為 8,411,546 美元，第二階段為 5,797,699 美元）。
EHA 提議將武漢病毒研究所 （WIV） 研究人員收集的嵌合蝙蝠冠狀病毒注射到“球狀”小鼠和基因改造以表達人類 ACE-2 受體的人源化小鼠中。
“Batified” 小鼠是經過輻照並注射蝙蝠骨髓的小鼠。
DEFUSE 提案包括關於計劃將人類特異性切割位點引入蝙蝠冠狀病毒的討論。
羅格斯大學（Rutgers University）的微生物學家理查德·埃布賴特（Richard H. Ebright）是非政府組織“現在生物安全”（Biosafety Now）領導團隊的成員，他於1月19日在推特上寫道：“2018年生態健康提案為構建一種病毒提供了分步計劃，該病毒具有一年後在武漢出現的病毒的序列和特性：SARS-CoV-2。
“EcoHealth 及其合作夥伴四年來的謊言現在需要結束。”
Ebright 於 1 月 18 日在推特上寫道：“EcoHealth 2018 年 DARPA 提案草案中 BsmBI 的訂單行相當於一把冒煙的槍。
Ebright 指的是可用於克隆的 BsmBI 限製性內切酶。
“作為一種 IIS 型限製性核酸內切酶，BsmBI 可用於無縫和非無縫定向克隆策略，”他在推特上寫道。
出現在 DEFUSE 項目的 USGS 合作者 Tonie Rocke 的預計預算中的行。Emily Kopp 說，雖然 Rocke 準備與 Baric 合作，但目前尚不清楚她是否是這項基因工程工作的核心。
作家兼講師 Jan Hommel 在 Covid-19 之前曾經是一名神經科醫生，他在推特上發表了他對擬議的 BsmBI 收購相關性的看法。
Hommel 在推特上寫道，在 DEFUSE 文件中發現購買提案就像找到一把帶有謀殺案肇事者指紋的槍。
生物工程師和免疫學家瓦倫丁·布魯特爾 （Valentin Bruttel） 表示，DEFUSE 草案文件（摘錄如下）顯示，生態健康聯盟計劃使用六個片段來組裝合成病毒，“使用不會幹擾編碼序列的獨特核酸內切酶位點，並購買 BsmBI”。
Emily Kopp 在她為 USRTK 撰寫的報告中說，SARS-CoV-2 具有高度傳染性，但在人類中沒有發生太大進化。
“病毒'開箱即用，準備感染'，”她寫道。“受體結合結構域似乎對人類 ACE2 受體進行了'微調'，但在首次溢出到人類體內時幾乎沒有遺傳變異，這給試圖證明它是自然出現的病毒學家提出了一個困難的'悖論'。”
她說，USRTK 獲得的文件證實，與武漢實驗室合作的科學家試圖在他們的研究中選擇與人類 ACE-2 結合良好的受體結合域 （RBD）。
“SARS-CoV-2 的基因組與 SARS 的遺傳差異在 25% 的範圍內，”Kopp 補充道。
Kopp 說，USRTK 獲得的文件首次顯示，與武漢實驗室合作的一名病毒學家計劃設計新的刺突蛋白——這與該合作將整個刺突蛋白插入病毒骨架的公開工作形成鮮明對比。
“提案中的語言表明，這項工作可能涉及未發表的病毒，產生了未發表的工程刺突蛋白，”她寫道。
Bruttel 說，在他看來，DEFUSE 提案一直是“SARS2 如何產生的精確藍圖”。
USRTK 獲得的文件草案包含“更多令人震驚的細節”，他在 1 月 18 日發推文說。
Bruttel、Alex Washburne 和 Tony VanDongen 於 2022 年 10 月發表了一篇預印本（於 2023 年 4 月更新），他們在其中指出，SARS-CoV-2 基因組包含一種通常在合成病毒中發現的限製性位點模式，但不存在於相關的天然病毒中。
他們解釋說，為了在實驗室中構建天然冠狀病毒的合成變體，研究人員經常使用一種稱為體外基因組組裝的方法。
這三位科學家假設 SARS-CoV-2 是由六個片段組裝而成的，使用 BsmBI 作為骨架，使用 Bsal 限製性核酸內切酶作為 RBD 或弗林蛋白酶切割位點 （FCS） 變體，並且這些限製性位點異常地引入了許多同義突變。
VanDongen 在 1 月 18 日發推文說：“對我們預印本的主要（顯然沒有根據的）批評之一是：'為什麽隻關注 BsmBI 和 Bsal？
“我們解釋了這些酶如何成為 CoV 反向遺傳學係統的首選，並受到 WIV 等實驗室的青睞。現在我們有 DEFUSE 收購 BsmBI。甜蜜的......”
FCS 是四個氨基酸的片段，它使病毒能夠利用人體內的弗林蛋白酶作為酶來溶解其塗層，從而釋放其遺傳物質來感染細胞。Furin 切割位點往往比使用其他酶的切割位點更具傳染性。
Bruttel 解釋說，弗林蛋白酶切割位點使冠狀病毒能夠感染新的宿主並導致嚴重疾病，因為它能夠感染神經元。
“包括 [Ralph] Baric 和 Shi [Zhengli] 在內的病毒學家將 FCS 引入各種危險的冠狀病毒刺突蛋白中，”他在推特上寫道。
石正麗是武漢病毒研究所的高級科學家。拉爾夫·巴裏克 （Ralph Baric） 在美國北卡羅來納大學教堂山分校 （UNC） 負責冠狀病毒研究。
Bruttel 說，DEFUSE 沒有獲得 DARPA 的資助，但研究人員有時會在資金獲得批準之前就開始項目，WIV 非常相似的研究項目是由美國和中國的機構資助的。
他補充說，製造合成病毒也非常便宜。“根據 R. Baric 的說法，大約 6000 美元就足夠了，”他在推特上寫道。
SARS-CoV-2 的刺突蛋白由兩個亞基 S1 和 S2 組成。S1 識別並與 ACE-2 結合，S2 介導病毒細胞膜融合。病毒的 FCS 位於 S1/S2 交界處。
已經提出的問題是“該網站是自然演變的，還是研究人員插入到該交界處的？科學家們過去曾嚐試將 FSC 工程到 S1/S2 連接，他們反複進行了功能獲得性研究。
Bruttel 說，一些病毒學家認為，DEFUSE 提案中隻提到了刺突蛋白 S2 區域的 FCS，但提案草案實際上提到了 S1/S2 邊界的 FCS。
在早期草案中指出：“在某些情況下，組織培養適應引入了弗林蛋白酶切割位點，該位點也可以指導進入過程，通常是通過切割其他冠狀病毒 S2 中 757 位和 900 位的 S，而不是 SARS。
位置 757 是 S1/S2 站點，位置 900 是 S2 站點。
以下摘自 DEFUSE 提案的早期草案，指的是 S1/S2 邊界的 FCS。
EHA 的最終提案包括在蝙蝠冠狀病毒中引入“人類特異性切割位點”。
“有人提出了人類蛋白酶特異性位點插入，”DRASTIC 在 2021 年發布泄露文件時表示。
“該提案沒有具體說明哪種蛋白酶，但確實在前麵的文本中討論了弗林蛋白酶。”
HAE（人氣道上皮）培養物可有效模擬人支氣管環境。
USRTK 表示，Ralph Baric 計劃每年設計 20 個或更多“嵌合”SARS 相關病毒刺突蛋白，以及 2 到 5 個全長工程 SARS 相關病毒。
Jan Hommel 在 X （Twitter） 上的評論中提到了 Bruttel、Washburne 和 VanDongen 在 bioRxiv 上發布的預印本。
他說，SARS-CoV-2 的基因組中有許多切割位點，確保病毒可以被切割成碎片，從而可以輕鬆地將它們與另一個基因交換，就好像它是一個模塊一樣。
“此外，與 BANAL52 和 RaTG13 等類似病毒相比，這些切割位點在基因組中的分布要規則得多。”
Hommel 說，這與“反向遺傳學”係統非常契合，該係統允許人們快速輕鬆地製造人工病毒，“因為你可以輕鬆地將這六個片段中的每一個替換為來自不同病毒的另一個片段”，包括包含 RBD 和 FCS 的部分。
Washburne 等人在他們的預印本中說：“區分 SARS-CoV-2 限製性位點的突變類型（同義或沉默突變）是工程學的特征，這些沉默突變在限製性位點中的集中極不可能是由隨機進化產生的。限製性位點指紋和產生它們的突變模式在野生冠狀病毒中極不可能，而在合成病毒中幾乎普遍存在。我們的研究結果強烈表明 SARS-CoV-2 的合成來源。
他們說，SARS-CoV-2 的限製性圖譜與許多以前報道的合成冠狀病毒基因組一致，符合有效反向遺傳係統所需的所有標準，“與近親不同的是，在這些看起來像合成的識別位點中，同義突變率要高得多”，並且具有合成指紋，不太可能是從其近親進化而來的。
懷特黑德研究所人類基因組計劃研發主管/麻省理工學院 Kevin McKernan 於 1 月 19 日在推特上寫道：“許多人不想談論實驗室泄漏，因為他們將其視為敘事和心理分析的一部分。但最終確定這是實驗室起源的證據昨天下降了。DEFUSE 提案列出了@VBruttel@WashburneAlex預測的@tony_vandongen酶的零件編號。
USRTK 表示，EHA 主席彼得·達紮克 （Peter Daszak） 和拉爾夫·巴裏克 （Ralph Baric） 向五角大樓隱瞞了他們打算在寬鬆的安全標準下在武漢進行高風險冠狀病毒研究的意圖。
DEFUSE 提案的早期草案包含來自“PD”和“BRS”的評論，電子郵件顯示 PD 是 Daszak，BRS 是 Baric。
USRTK 表示，該草案表明，EHA 提議在武漢進行 DEFUSE 實驗，其安全預防措施比美國要求的要少——顯然是為了節省成本。
DEFUSE 提案的早期草案指出，新型冠狀病毒的工程和測試將在生物安全二級 （BSL-2） 條件下進行。
然而，BSL-2 後來被編輯為 BSL-3。
在對該文件的評論中，巴裏克表示，如果美國研究人員知道新型冠狀病毒的工程和測試工作將在 BSL-2 實驗室進行，他們可能會“嚇壞”。
在最終的 DEFUSE 提案中指出：“使用蝙蝠和/或轉基因小鼠的實驗工作將在 WIV、杜克-新加坡國立大學、北卡羅來納大學或 NWHC [美國地質調查局國家野生動物健康中心] 的 BSL-3 實驗室進行。
還指出，新加坡和美國的 WIV 和實驗室將使用活蝙蝠進行感染實驗，通常使用圈養的蝙蝠群落。
新發布的文件中的注釋顯示，拉爾夫·巴裏克 （Ralph Baric） 設計的刺突蛋白並未出現在公共科學文獻中，“而且在提案提交給 DARPA 時，這項工作可能已經在進行中”，艾米麗·科普 （Emily Kopp） 寫道。
文件中說明了以下內容：
“雖然 HKU3 蝙蝠病毒是已知的，但對'稱為 293 的蝙蝠病毒'的提及是模棱兩可的，似乎並不是指任何公共病毒組，”Kopp 寫道。
科普說，新發布的文件挑戰了美國國立衛生研究院（National Institutes of Health）和一些病毒學家反對該研究提案與大流行起源相關性的論點。
她寫道：“他們認為，這項美中科學合作隻是計劃從公共文獻中已有的病毒骨架開始設計病毒，而這些病毒骨架太不同了，不可能在大流行中發揮作用。
“然而，新文件顯示，科學家們計劃使用新的反向遺傳學係統並在體內測試病毒——換句話說，設計活的新型病毒。
“這些文件將資助中要研究的 SARS 相關病毒描述為構成'類似 SARS 的新大流行的明確和現實的危險'。”
更新： 1 月 21 日，關於尋找 Covid-19 起源的《病毒》一書的合著者 Alina Chan 在推特上寫道：“冒煙的槍意味著確鑿的證據。這意味著被告無法證明自己的清白。我認為迄今為止沒有任何公開可用的 #OriginOfCovid 證據符合該定義。但很明顯，重要證據一直並且可能仍在被隱瞞。
她還說：“無論你如何看待拆解草案，問題是為什麽武漢科學家和他們的美國合作者在2018-2019年的所有交流都沒有傳票？
在後續推文中，Chan 說：“Defuse 是可能的實驗室的令人信服的證據 #OriginOfCovid 我認為實驗室泄漏應該是默認假設。然而，公開可用的證據存在差距。我們不知道 2018-2019 年武漢病毒研究所發生了什麽。
1 月 21 日，Chan、Bruttel、Washburne 和 VanDongen 在 Twitter 空間與 BioSafety Now 的 Justin Kinney 和 Bryce Nickels 進行了討論。*
在長達兩個多小時的極其深入的對話中，科學家們談到了支持實驗室起源假說、DEFUSE 提案以及 Bruttel 等人進行的研究的現有證據。
Chan 說，建製派科學家曾試圖恐嚇其他提出 SARS-CoV-2 可能實驗室起源問題的科學家，稱他們為幼兒園兒童，貶低他們，並說他們不知道自己在說什麽。
金尼說：“非常令人沮喪的是，我們仍在從《信息自由法》的要求中了解到如此關鍵的信息......令人震驚的是，聯邦政府沒有對這種病毒的起源進行積極的調查。
他說，有充分的理由相信，美國 UNC（北卡羅來納大學教堂山分校）和 EcoHealth Alliance 都有更多關於 Covid-19 大流行起源的信息。
他補充說，雖然對於最近發布的有關 DEFUSE 撥款提案的文件是否是“冒煙的槍”存在意見分歧，但大量科學證據指向 SARS-CoV-2 的基因工程起源。
Bruttel 提到了 DEFUSE 文件並非由相關人員自願提供的事實：“我們應該把這裏的每一塊石頭都交出來。我們應該搜索這些實驗室。我們應該查看新加坡、美國和中國參與 DEFUSE 的團隊的每一台計算機，“他說。
自 2020 年 7 月以來，USRTK 通過信息自由請求獲得的所有文件均可在此處獲得。
*更新：
Kinney 補充說：“展望未來，我也將無法就 SARS-CoV-2 的起源、對科學的影響以及未來實驗室產生的大流行病的風險發表公眾評論。
他在推特上寫道：“如果您是一名科學家，並且擔心 SARS-CoV-2 的起源、對科學的影響以及未來實驗室產生的大流行病的風險，**請大聲說出來**。少數科學家就這些問題發表意見可以產生很大的不同。
科學家表示，生態健康聯盟的 DEFUSE 提案是 SARS-CoV-2 的藍圖——改變時代 (changingtimes.media)
