關於co－immunoprecipitation

實驗室美國學生連續做了三次co－IP，都沒有成功，用的是前列腺癌細胞LNCaP。 這種細胞的重複性很差，長得相對其他的癌細胞慢，但是從來沒有出現問題在western上。最後發現錯誤在於1.使用的RIPA lysis buffer 可能不對，加錯了其他試劑。通常的配方是每30ml RIPA 加 Protease Inhibitor Cocktail 300ul0.5M NaF 300ul1M Sodium Orthovanadate (Vanadate, Na 3 VO 4 ) 6ul5M B-Glycerol phophate 300ul2. 細胞的密度決定加多少量lysis buffer100mm plate 70％以上的confluence 通常是用300ul lysis buffer， 太少，細胞不能全部裂解；太多，裂解液的蛋白濃度不夠高，下一步的效果就受到限製。3. 通常IP的背景很髒，所以在洗的步驟要小心，洗3次以上，本實驗室常用的是4次，背景很幹淨