想看蛋白質檢測滴進來啦。。剛勾到的。。

在三鹿事件之前就是用這個凱式定氮法來測試牛奶中的全氮含量並以推算蛋白質含量的。。

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.原理：凱氏定氮法首先將含氮有機物與濃硫酸及催化劑共熱，經一係列的分解、碳化和氧化還原反應等複雜過程，最後有機氮轉變為無機氮硫酸銨，這一過程稱為有機物的消化。然後將消化液轉入凱氏定氮儀反應室，加入過量的濃氫氧化鈉，將NH4+轉變成NH3，通過蒸餾把NH3驅入過量的硼酸溶液接受瓶內，用硼酸吸收，形成四硼酸銨，然後用標準鹽酸滴定，直到硼酸溶液恢複原來的氫離子濃度。滴定消耗的標準鹽酸摩爾數即為NH3的摩爾數，通過計算即可得出總氮量。在滴定過程中，滴定終點采用甲基紅-次甲基藍混合指示劑顏色變化來判定。測定出的含氮量是樣品的總氮量，其中包括有機氮和無機氮。可以在換算成粗蛋白質。
以蛋白質為例，反應式如下：
消化：蛋白質 + H2SO4→（NH4）2SO4+ SO2↑+ CO2↑+ H2O
蒸餾：（NH4）2SO4 + 2NaOH→ Na2SO4+ 2H2O + 2NH3↑
2NH3 + 4H3BO3→（NH4）2B4O7+ 5H2O
滴定：（NH4）2B4O7+ 2HCl + 5H2O→2NH4Cl + 4 H3BO3
4.2儀器與用具：萬分之一的分析天平、定氮儀、滴定管、錐形瓶、粉碎機、研缽等
4.3試液與試劑
4.3.1催化劑：硫酸鉀10g、硫酸銅150g。
4.3.2溶劑：硫酸、純化水
4.3.3 40%氫氧化鈉溶液、2%硼酸吸收液（20g硼酸溶解於500ml熱水中，加入10ml混合指示劑）、
4.3.4甲基紅-溴甲酚綠混合指示液、甲基紅指示液、稀硫酸、鹽酸滴定液（0.05mol/L）。
4.4測試方法（常量法）
4.4.1稱樣：取供試品適量（約相當於含氮量25～30mg），精密稱定，供試品如為固體或半固體，可用濾紙稱取，並連同濾紙置幹燥的消化管中。
4.4.2消煮：依次加入硫酸鉀10g和硫酸銅粉未0.5g，再沿瓶壁緩緩加硫酸20ml；在消化爐上進行消化，45min後使溶液的溫度保持在沸點以下，等泡沸停止，強熱至沸騰，俟溶液成澄明的清色，放冷。
4.4.3蒸餾：加40%氫氧化鈉溶液75ml，注意使沿瓶壁流至瓶底，自成一液層，另取2%硼酸溶液50ml，置500ml錐形瓶中，加甲基紅-溴甲酚綠混合指示液2-3滴；將冷凝管的下端插入硼酸溶液的液麵下，加熱蒸餾，至接收液的總體積約為150ml時，將冷凝管尖端提出液麵，使蒸氣衝洗約1分鍾，用水淋洗尖端後停止蒸餾。
4.4.4滴定：餾出液用鹽酸滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液由藍綠色變為灰紫色，並將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml鹽酸滴定（0.05mol/L）相當於1.401mg的N。
4.5 計算
（V-V0）×N×1.401
含氮量（%）= ×100%
G×0.05×1000
式中： V—為樣品滴定消耗數ml
V0—為空白滴定消耗數ml
N—為硫酸滴定液濃度mol/L
G—為取樣量g

蛋白質含量(%)=含氮量×K
K為固定值6.25、5.7等
4.6 注意事項
4.6.1蒸餾裝置連接後應嚴密。
4.6.2消化時，若發現瓶壁上有黑點，可適當轉動燒瓶，使硫酸回流時將黑點洗下，以保證消化完全。且消化液應放冷後再沿瓶壁緩緩加水，防止供試液局部過熱爆沸，衝出瓶外
4.6.3蒸餾過程中若無黑色CuO析出，說明加入堿量不足，應補足堿量或重做試驗。
4.6.4約80%以上的氨在最初1~2分鍾內蒸出，初蒸速度不宜太快，以免氨蒸出後未能及時被吸收而逸出。
4.6.5錐形瓶加入硼酸溶液和指示劑後應顯酒紅色；如顯綠色說明錐形瓶有堿性物質汙染。蒸餾出的氨接受液應趕快滴定，避免時間過長影響測定結果。