5,Run Column 所用之Solvent 在配好後,應以TLC 再作檢測一次,以確定是否為恰當之Solvent 係統。尤其若需要收集一點時,則在分離前之混合物必須留一些以便作比較參考用。
6,在填裝層析管(packing column)時若不慎有氣泡(如Solvent 部分流幹)可補滿Solvent後以木棒(或簽字筆)輕敲管壁,讓氣泡浮出。因為氣泡中沒有矽膠,分離物流經此處時移動速度會比其他處快,而造成此區域分離物與其他無氣泡處之分離物排列次序混亂之現象,影響分離效果。
7,在 Run Column 時所收集的分離份(fraction)體積(毫升)通常為矽膠克數的1/4 以下。實際情況可用下列公式來求出約略值,如欲分離成分A 與B,而A 之Rf 值為0.3,B 之Rf 值為0.2 則最適合之分離份(fraction)體積為:設矽膠量為50g
8,在作層析時,如何濃密而又均勻的將樣品 Loading 在起始點乃是層析分離成功與否的關鍵。通常的做法是將樣品溶解在不超過其體積兩倍之低極性溶液,然後小心的將樣品塗布於起始點。柱層析(Column Chromatography)時務必等樣品液完全進入固定相(Stationary phase)後,以少許溶劑再將管壁上沾著的樣品衝入固定相後,才可正式加溶劑開始 Run Column。由於大部分化合物在低極性溶劑中溶解度很差,我們也可以將樣品均勻地與少量矽膠混合後幹法上樣。這也是我們采用最多的方法。
9,在 Run Column 時切記不可使Column 內溶劑過少而使靜相頂端幹涸,且在添加溶劑也要小心,不可使溶劑急衝而下破壞靜相之頂層,尤其在剛開始Run Column 時,否則將造成樣品之過量稀釋分散,從而嚴重影響層析效果。
10,在收集時,可以先行以 Rf 值以固定相之總量計算大約樣品出現時之流出溶劑體積,在此體積達1/2 量前可以大瓶收集,1/2 量之後再以預定之小容器分別收集。
11,Run Column 時Solvent 之流速一般而言(HPLC,MPLC 除外),流速均以越快越好,因為一般而言Mobile Phase Velocity 與Plate height 成反比,而Plate heigh 越小越好,故動相流速是越快越好。故Flash Chromatography 之效果常較一般Gravity column 為佳。
第三部分:蒸餾
1,蒸餾時務必先判斷你們樣品在其沸點時是否會分解,否則就必須選擇減壓蒸餾或其他的分離方法。
2,一般實驗室的蒸餾僅用於分離沸點差 50℃以上物質。(通常隻是用於除去溶劑或有色的高分子粘滯物)。如欲分離沸點較接近之物質則需加裝分餾管,而分餾管之長度即裝填物需視分離之物質沸點接近之程度而定。一般而言,沸點差小於20℃或總量小於1 克,則需特殊裝置(如Spinning band or molecular distillation)否則便無法做分餾了。
3,蒸餾時其外加熱媒之溫度與蒸出沸點差至少會在 30℃左右。
4,在做減壓蒸餾前,務請查明所有欲蒸餾物的沸點,以免於壓力速降時造成‘突沸’而造成整個樣品衝出。尤其需注意溶劑是否已在Rotary evaporator 上抽幹。
5,如果無參考圖表,可約略以下法計算各物質之低壓沸點。通常壓力由760mmHg 減至25mmHg 其沸點降低100℃,其後壓力每降低一半,其沸點降低10℃。
6,若兩個或更多物質混合時,通常會形成各種成分之共沸物。而在較低的溫度即沸騰汽化而出。此種情形最常發生於樣品含溶劑的狀況。
7,減壓蒸餾時,務必加裝冷卻 Trap,否則不但可能因樣品被吸入泵而失去樣品,也會損壞真空泵。
第四部分:其他日常操作
1,使用樣品後盡可能將其歸還回原位,尤其需冷藏或幹燥者必須封好後放回原位。所有裝於燒瓶內之化合物,應隨時標明編號(以膠帶粘貼以便清除)。
2,烘箱非儲藏櫃僅僅用於烘幹玻璃器皿,烘幹後需在近期內(一天內)使用者才放入,其餘物品均應放於抽屜或涼幹架。
3,如果 Solvent 或低沸點物(bp<150℃)能在Rotary evaporator 上清除者,必須先在Rotaryevaporator 上處理至不能再濃縮後,才可放上Vacuum pump。否則低沸點物可能被抽入泵中。
4,使用 Vacuum pump 必須要幹冰作Trap 之冷媒,使用前必檢查Trap 內是否有殘留物,若有,則需清除後方可使用。並在使用完後立即清理Trap 之廢物。
5,萃取時選用之 Solvent 應注意其比重,若其比重大於1(如CH2Cl2, CHCl3, CCl4)而反應原液為比重小於1 之溶劑,(如Ether, THF 或Benzene)時,切不可同時混入分液漏鬥,否則會有乳化不分層之現象,造成分離困難。
6,當溶液裝於有磨口的容器內時,在任何操作狀況時,均應避免使溶液接觸到磨口,因為當溶劑揮發後溶質將殘留在磨口上,會使你損失所要的Compound,而在加蓋常會有打不開之現象。所以若不慎或有不得以有溶液接觸磨口,則應以純溶劑浸潤接觸部分,務使溶劑殘留之痕跡消除為止。
7,實驗記錄本應包含反應方程式,參考文獻,試藥用量(Weight,Mole),理論產率,實驗步驟,TLC,光譜記錄,與注意事項或結論。
8,實驗室對量的記載應盡量保持三為數字,以求其精確性;對不滿 1 之單位應用下一級之單位。如0.1 克應寫為100mg,0.1mol 應寫為100mmol。
9,實驗本務必按進度如實記錄,要如實做到‘做到哪裏,寫到哪裏’,而且不得帶出實驗室。實驗記錄務必跟隨實驗進度將所有事實詳細記錄,成功之反應必有產物,產率,顏色,狀態及純化方式,失敗之實驗必說明鑒定失敗的方法及證據,並盡可能說明原因。